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發(fā)酵大豆蛋白中小肽的測(cè)定

007畜牧 2014-4-14 11:53

1003 原作者: 于炳欣

簡(jiǎn)介

1、原理：利用三氯醋酸作蛋白質(zhì)沉淀劑，將發(fā)酵大豆蛋白中的蛋白質(zhì)和肽鏈較長(zhǎng)的肽沉淀，并將其中的短鏈小肽用酸溶解出來(lái)，經(jīng)過(guò)濾、離心、消化、蒸餾，測(cè)定其蛋白質(zhì)含量，并以其占樣品粗蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)來(lái)表示含量。本 ...

1、原理：
利用三氯醋酸作蛋白質(zhì)沉淀劑，將發(fā)酵大豆蛋白中的蛋白質(zhì)和肽鏈較長(zhǎng)的肽沉淀，并將其中的短鏈小肽用酸溶解出來(lái)，經(jīng)過(guò)濾、離心、消化、蒸餾，測(cè)定其蛋白質(zhì)含量，并以其占樣品粗蛋白質(zhì)的百分?jǐn)?shù)來(lái)表示含量。本方法是參照中華人民共和國(guó)輕工行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)大豆肽粉標(biāo)準(zhǔn)(QB/ T 2653 -2004)基礎(chǔ)上修訂而來(lái)。

2、試劑及儀器：
1）100ml燒杯；
2）10ml，50ml移液管；
3）干過(guò)濾裝置；
4）半微量法或全量法粗蛋白質(zhì)測(cè)定的試劑和裝置；
5）15％三氯醋酸溶液；
6）4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘的離心機(jī)。
3、方法：
準(zhǔn)確稱取樣品6克于100 ml燒杯中,準(zhǔn)確加入15 %三氯乙酸溶液50 毫升，混合均勻，靜置5 分鐘，以中速定性濾紙干過(guò)濾，棄去少許初始濾液，將濾液轉(zhuǎn)移至離心管，在4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘下離心10 分鐘，準(zhǔn)確移取其上清液10ml于消化管中，按半微量法（消化后定容至100ml，準(zhǔn)確移取其中10ml進(jìn)行蒸餾）或全量法粗蛋白質(zhì)測(cè)定方法測(cè)定其粗蛋白質(zhì)含量。同時(shí)做空白試驗(yàn)、測(cè)定樣品的粗蛋白質(zhì)的含量。
4、結(jié)果與計(jì)算：
小肽%（半微量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×10×5÷m×100%÷cp×100%
小肽%（全量法）=（V1－V0）×C×6.25×0.014×5÷m×100%÷cp×100%
式中：
V1--餾出液消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml；
V0--空白試驗(yàn)消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml；
C--鹽酸的摩爾濃度，mol/l；
6．25×0．014--蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換系數(shù)；
m--稱取樣品質(zhì)量，ｇ；
cp—樣品的粗蛋白質(zhì)含量，%。
重復(fù)性: A）、每個(gè)試樣的兩個(gè)平行樣間允許相對(duì)偏差為其算術(shù)平均值的10%，以其算術(shù)平均值上報(bào)結(jié)果；
C）、所得的結(jié)果是指小肽占粗蛋白質(zhì)的百分含量。
因其中含有無(wú)機(jī)氮，測(cè)得結(jié)果應(yīng)減去無(wú)機(jī)氮，見(jiàn)非蛋白氮的測(cè)定。

移液管；
3）干過(guò)濾裝置；
4）半微量粗蛋白質(zhì)測(cè)定試劑和裝置；
5）15％三氯醋酸溶液（TCA溶液）；
6）4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘的離心機(jī)。
三、方法：準(zhǔn)確稱取樣品3克于100 ml燒杯中,加入15 %TCA (三氯乙酸) 溶液25 毫升,混合均勻,靜置5 分鐘。將溶液定量轉(zhuǎn)移,在4000 轉(zhuǎn)/ 分鐘下離心10 分鐘后,取全部上清液，用干的濾紙過(guò)濾，準(zhǔn)確移取其濾液10ml于消化管中，按測(cè)定粗蛋質(zhì)方法消化、定容（100 ml）、移取1 0ml消化液蒸餾，測(cè)定其粗蛋白質(zhì)含量（半微量定氮法）。同時(shí)做空白試驗(yàn)。
四、結(jié)果：
小肽%（占干基）=｛（V-V0）×C（HCl）×6．25×0．014×2．5（25ml÷10ml）×10（100 ml÷10ml）｝÷m×100%

式中： V---樣品消耗HCl的體積，ml；
V0---空白消耗HCl的體積，ml；
C（HCl）---鹽酸的摩爾濃度，mol/l；
6．25×0．014---蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)換系數(shù)。
m---稱取樣品質(zhì)量，ｇ。
小肽%（占蛋白質(zhì)）=小肽%（占干基）÷粗蛋白質(zhì)%×100

重復(fù)性: A）、每個(gè)試樣取兩個(gè)平行樣進(jìn)行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為結(jié)果； B）、允許絕對(duì)偏差為10%；
C）、以小肽占粗蛋白質(zhì)的百分含量上報(bào)結(jié)果。

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