輔酶Q10 脂質(zhì)體的制備及穩(wěn)定性研究

    輔酶Q10（coenzyme Q10，CoQ10）廣泛存在于線粒體內(nèi)膜中，是細(xì)胞代謝的激活劑。臨床上輔酶Q10 主要用于治療心血管疾病 [1]，對其他多種疾病也有輔助療效，目前有片劑、膠囊、軟膠囊、注射劑等多種劑型。因輔酶Q10 極不溶于水，當(dāng)前上市的輔酶Q10 注射劑穩(wěn)定性較差，輔酶Q10 極易析出，有待于改進(jìn)劑型。脂質(zhì)體可增強(qiáng)藥物的穩(wěn)定性，且對缺血心肌、肝臟等組織具有被動(dòng)靶向性。國內(nèi)有輔酶Q10 脂質(zhì)體質(zhì)量評價(jià)的報(bào)道[2]，但較為籠統(tǒng)，作者制備了輔酶Q10 脂質(zhì)體，較系統(tǒng)的研究了其穩(wěn)定性，并采用新方法測定了輔酶Q10 脂質(zhì)體包封率。 

　　1 儀器與藥品 

　　1.1 儀器 

　　集熱式恒溫磁力攪拌器（浙江省樂成電器廠）；Lipex–Extruder 擠出儀（Northern 公司）；微孔濾膜（上海亞東分離器材廠）；HPLC 色譜儀（Waters 公司）；PHS–2C 型精密酸度計(jì)（上海雷磁儀器廠）；GAST 真空泵（MFG 公司）。 

　　1.2 藥品 

　　輔酶Q10（沈陽濟(jì)世制藥公司）；注射用豆磷脂 (上海太偉藥業(yè))；膽固醇（天津博迪化工有限公司）；無水乙醇為色譜純，其他試劑為分析純。 

　　2 方法與結(jié)果 

　　2.1 輔酶Q10 脂質(zhì)體的制備 

　　2.1.1 乙醇注入法制備輔酶Q10 脂質(zhì)體 

　　精密稱取一定量的輔酶Q10 及一定質(zhì)量比的磷脂和膽固醇，以2 mL 無水乙醇溶解，快速均勻注入到pH=7.0 的磷酸鹽緩沖液10 mL 中，60 ℃下攪拌并減壓蒸發(fā)除去乙醇，即得輔酶Q10 脂質(zhì)體混懸液。 

　　2.1.2 擠出法分離游離藥物 

　　參考文獻(xiàn)[3]，將制得的脂質(zhì)體混懸液在0.5 MPa、室溫條件下過0.45 m 微孔濾膜，擠出3 遍。 

　　未包封的游離藥物殘留在膜上，通過膜的脂質(zhì)體混懸液為脂質(zhì)體成品。 

　　2.2 包封率及含藥量測定 

　　輔酶Q10 脂質(zhì)體成品經(jīng)濾膜過濾分離后，本文作者采用高效液相檢測方法對輔酶Q10 脂質(zhì)體的包封率進(jìn)行了測定。首先，將脂質(zhì)體成品在0.5 MPa、室溫條件下過0.22 　m 微孔濾膜。過膜前與過膜后脂質(zhì)體混懸液中藥物量分別為總藥物含量和包封于脂質(zhì)體中的藥物量，將過膜前與過膜后的脂質(zhì)體混懸液用流動(dòng)相稀釋相同倍數(shù)。然后，用HPLC 測定3 次，按E (%)=ρ2/ρ1×100%計(jì)算包封率。色譜條件為色譜柱：Kromasil ODS 柱（250 mm×4.6 mm，5 m，大連）；流動(dòng)相：甲醇-無水乙醇（V:V=1:9）；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；紫外檢測波長：275 nm；進(jìn)樣量：20 L；外標(biāo)法。輔酶Q10 質(zhì)量濃度在0~35 g·mL-1 內(nèi)呈良好線性關(guān)系。 

　　輔酶Q10 脂質(zhì)體成品的含藥量按上述色譜條件同法測定3 次。經(jīng)測定輔酶Q10 脂質(zhì)體中平均藥物含量為1.93±0.07 mg·mL-1，輔酶Q10 脂質(zhì)體成品包封率為99.2%±0.8%。 

　　2.3 過氧化值的測定 

　　精密吸取脂質(zhì)體1 mL，置10 mL 具塞離心試管中，加入TTH 試液（取三氯醋酸（TCA）30 g、硫　代巴比妥酸（TBA）0.75 g，加0.25 mol·L-1 的鹽酸200 mL，溫?zé)嶂寥?，放冷后過濾）5 mL，混勻密閉，置100 ℃水浴中加熱30 min。放冷后再加TTH 試液4 mL，混勻后以4 000 r·min-1 離心10 min。取上清液，以TTH 試液為空白，測定532 nm 處的吸光度A，記作過氧化值[4]。 

　　2.4 外觀色澤 

　　觀察輔酶Q10 脂質(zhì)體成品的外觀及顏色變化。評定標(biāo)準(zhǔn)：淡黃色，不絮凝（――）；白色，不絮凝（＋－）；淡黃色，絮凝（＋－）；白色，絮凝（＋＋）。 

　　2.5 穩(wěn)定性考察 

　　2.4.1 光照影響 

　　取適量輔酶Q10 脂質(zhì)體成品，裝于密封小瓶中，置1 000 Lx 條件下照射10 d，于第0、1、3、5、10 d 取樣，考察藥物含量、包封率、過氧化值、pH 值等項(xiàng)目（見表1）。結(jié)果表明，輔酶Q10 脂質(zhì)體對光很不穩(wěn)定，應(yīng)避光保存。 

　　2.4.2 溫度影響 

　　取適量輔酶Q10 脂質(zhì)體成品，裝于密封小瓶中，分別置于25、40、60 ℃水浴中，放置10 d，定時(shí)取樣，考察穩(wěn)定性（見表2~4）。結(jié)果表明，輔酶Q10 脂質(zhì)體在25℃和40℃的條件下比較穩(wěn)定，在60℃下較不穩(wěn)定。 

　　3 討論 

　　輔酶Q10 原料藥遇光易分解，較不穩(wěn)定，在光照條件下藥物含量下降明顯。實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)盡量避光操作。制得的輔酶Q10 脂質(zhì)體在光照條件下也很不穩(wěn)定，應(yīng)避光保存。磷脂中含有不飽和脂肪酸鏈，容易被氧化和水解。磷脂水解產(chǎn)物最主要的是脂肪酸，可使溶液pH 值下降。但穩(wěn)定性考察中pH 值變化不大，可能是由于制劑中磷脂濃度較低，而且磷酸鹽緩沖液的存在，使pH 變化不明顯。磷脂的降解產(chǎn)物主要是過氧化物、丙二醛等，其中丙二醛能與硫代巴比妥酸反應(yīng)生成一種紅色物質(zhì)，在532 nm 處有最大吸收，可根據(jù)吸光度的大小來反應(yīng)磷脂的氧化程度。由于丙二醛不穩(wěn)定，在高溫和強(qiáng)光條件下會(huì)進(jìn)一步分解，因此在穩(wěn)定性加速實(shí)驗(yàn)中脂質(zhì)體混懸液的過氧化值出現(xiàn)了先增加后降低的現(xiàn)象。隨著溫度的升高，輔酶Q10 脂質(zhì)體的穩(wěn)定性有所下降，因此制劑應(yīng)在常溫或低溫下保存。制備的輔酶Q10 脂質(zhì)體工藝簡單、質(zhì)量可控，在室溫和避光條件下，可長期放置，性質(zhì)穩(wěn)定。