忍冬藤作為肉雞飼料添加劑的促生長(zhǎng)和免疫作用研究

　　1.6　指標(biāo)檢測(cè)

　　1.6.1　肉雞成活率檢測(cè)　  在試驗(yàn)第21ｄ和第40ｄ分別統(tǒng)計(jì)各組試驗(yàn)雞的成活率,檢測(cè)不同劑量的忍冬藤飼料添加劑和抗生素對(duì)肉雞成活率的影響

　　成活率=(成活雞數(shù)/試驗(yàn)雞數(shù))×100%

　　1.6.2　肉雞增重與飼料轉(zhuǎn)化率　  試驗(yàn)第21天,第40天進(jìn)行稱重,分別計(jì)算每只試驗(yàn)雞重量,統(tǒng)計(jì)飼料利用量,檢測(cè)和對(duì)比忍冬藤飼料添加劑和抗生素對(duì)增重和料肉比的影響。

　　1.6.3　肉雞免疫器官指數(shù)的檢測(cè)　  選擇脾臟、法氏囊和胸腺作為免疫器官,試驗(yàn)結(jié)束以后,從每個(gè)試驗(yàn)組中隨機(jī)抽取5只雞,空腹稱重,屠宰后分離脾臟、法氏囊和胸腺,測(cè)定其重量,檢測(cè)忍冬藤飼料添加劑和抗生素對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)(器官重ｇ/活體重ｋｇ)的影響。

　　1.6.4　肉雞血清生化指標(biāo)檢測(cè)　 試驗(yàn)雞40ｄ齡時(shí),分別在每個(gè)試驗(yàn)組中隨機(jī)抽取5只,翅靜脈采血2ｍＬ,分離血清-20℃保存待測(cè)。檢測(cè)忍冬藤飼料添加劑和抗生素對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響。谷草轉(zhuǎn)氨　、谷丙轉(zhuǎn)氨　、球蛋白、總蛋白、尿素氮、甘油三酯、總膽固醇采用ＸＬ-600全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定[2]。

　　1.6.5　忍冬藤飼料添加劑和抗生素對(duì)小白鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響試驗(yàn)　  為了驗(yàn)證忍冬藤飼料添加劑增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的功能,按照中草藥藥理研究方法學(xué)中的有關(guān)規(guī)定,采用小白鼠進(jìn)行試驗(yàn)。將30只小白鼠分為三組,每組10只。?組用忍冬藤飼料添加劑按每只2ｇ/2ｍＬ/ｄ劑量灌服;?組用西藥左旋咪唑按2ｍｇ/ｍＬ/ｄ劑量灌服;?組作為空白對(duì)照組灌服等量蒸餾水0.5ｍＬ/ｄ。連續(xù)給藥一周后,分別給小鼠腹腔注射1%蛋白 1ｍＬ;2ｈ后分別注射5%雞紅細(xì)胞懸浮液0.5ｍＬ;10ｈ后將小白鼠脫頸椎處死,仰位固定于鼠板,腹腔注射阿氏液2ｍＬ,充分轉(zhuǎn)動(dòng)固定板,然后抽取腹腔巨噬細(xì)胞洗液,離心,去掉上清液,涂片,→固定→染色→晾干→鏡檢。在油鏡下每片計(jì)巨噬細(xì)胞數(shù)200個(gè),然后按以下公式計(jì)算其吞噬指數(shù)與吞噬百分率[2]:

　　吞噬百分率=吞噬雞紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞 ×100%

　　吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞

　　將所觀察到的各組小白鼠的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理、分析和對(duì)比。

　　1.7　藥物對(duì)小白鼠脾淋巴細(xì)胞玫瑰花結(jié)形成的影響試驗(yàn)[2]。

　　淋巴細(xì)胞表面具有抗體,可與不同種動(dòng)物的紅細(xì)胞結(jié)合,形成玫瑰花瓣樣的細(xì)胞團(tuán),稱為玫瑰花結(jié)(ＲＦＣ),而形成率的高低,?？煞从硻C(jī)體細(xì)胞免疫功能的強(qiáng)弱,故可作為藥物影響免疫功能的指標(biāo)之一。本試驗(yàn)取小白鼠20只,隨機(jī)分成忍冬藤組和生理鹽水組,每組10只。每鼠腹腔注射5%綿羊紅細(xì)胞(ＳＲＢＣ)0.4ｍＬ(約4億個(gè)ＳＲＢＣ),1次免疫后,接著按組分別以0.4ｍＬ/20ｇ量給予忍冬藤水煎劑及生理鹽水灌胃,每日1次,連續(xù)4次后,末次給藥后1ｈ處死小白鼠,取出脾臟,按組稱重后剪碎,加入ＰＨ為7.6的Ｇｅｙ'ｓ液2ｍＬ混勻,
磨

碎
后
取上層液,以1000ｒｐｍ離心后去上清液,加入Ｇｅｙｓ液2ｍＬ,進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),加11%臺(tái)盼藍(lán)檢查活細(xì)胞數(shù)。將脾細(xì)胞懸液稀釋成8×106個(gè)細(xì)胞/ｍＬ,取0.1ｍＬ加入1%ＳＲＢＣ及經(jīng)ＳＲＢＣ吸收過(guò)的滅活小牛血清0.1ｍＬ混勻,以1000 ｒpm

　　離心10min 后放入4 的冰箱2h, 然后每管加入 1% 甲苯藍(lán) 20 L染色,再將細(xì)胞懸液滴于血球計(jì)數(shù)盤(pán)上,蓋上玻片,在高倍鏡下計(jì)數(shù)特異玫瑰花結(jié)形成的百分率.

　　2　結(jié)果與分析

　　2.1　數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析方法

　　采用ＳＰＳＳ10.0統(tǒng)計(jì)軟件中ＡＮＯＶＡ模塊進(jìn)行單因素方差分析和Ｄｕｎｃａｎ'ｓ多重比較,以Ｐ<0.05為顯著水平。試驗(yàn)結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

　　2.2　不同劑量的忍冬藤飼料添加劑和抗生素對(duì)肉雞成活率的影響

　　根據(jù)各組試驗(yàn)雞的存活數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果計(jì)算成活率,從表2可以看出,忍冬藤飼料添加劑組和添加抗生素組對(duì)肉雞成活率(%)的影響差異不顯著(Ｐ>0.05)。