微生態(tài)制劑對水產(chǎn)動物的生物活性研究

華牧偉業(yè)

　　微生態(tài)制劑對水產(chǎn)動物的生物活性研究
　?。ü枮I中科生物工程有限公司  趙前）
　　摘要：為測定微生態(tài)制劑“高免肽”對水產(chǎn)動物抗病、促生長功效以及生產(chǎn)應(yīng)用價值。首選藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，微生態(tài)制劑“高免肽”對大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌最小抑菌菌濃度分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。選擇大黃魚、真鯛、白鰱、草魚、花鰱魚和青蝦為實(shí)驗(yàn)動物，在基礎(chǔ)日糧中按比例0.1%添加高免肽。監(jiān)測實(shí)驗(yàn)魚蝦成活率、日增重、餌料投入比等生產(chǎn)性能比較指標(biāo)。結(jié)果顯示，高免肽對實(shí)驗(yàn)魚蝦成活率平均提高10%以上，青蝦養(yǎng)殖效果顯著。
　　關(guān)鍵詞：微生態(tài)、高免肽、水產(chǎn)動物、生物活性、生產(chǎn)性能
　　高免肽是由酵母細(xì)胞壁、生物多糖、生物抗菌肽、生物堿、苷類、蒽醌類及其還原衍生物和多種活性肽組成，具有提高免疫力、提高消化率、殺滅細(xì)菌真菌和原蟲、抵制病毒侵?jǐn)_等作用，是生物提高非特異性免疫的不可缺少的重要組成成分。與抗生素相比，具有高效、無耐藥性、無污染、無毒副作用等優(yōu)點(diǎn)，符合綠色環(huán)保飼料的要求，是理想的抗生素替代品。高免肽具有活性高、分子量小、熱穩(wěn)定性好、水溶性好和生物利用度高等特點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)通過在飼料中添加高免肽，比較對大黃魚、真鯛、白鰱、草魚、花鰱魚和青蝦的日平均增重、發(fā)病率、死亡率、餌料系數(shù)等生產(chǎn)性能影響，為高免肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　1 材料、方法、時間與地點(diǎn)
　　1.1 實(shí)驗(yàn)材料
　　試驗(yàn)用高免肽由哈爾濱中科生物工程有限公司提供，批號黑飼添字（2009）251015，陰涼、干燥處貯藏。
　　實(shí)驗(yàn)用菌株：大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌均由國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心惠贈。
　　1.2 時間和地點(diǎn)
　　試驗(yàn)地點(diǎn)：江蘇省鹽城市射陽縣黃沙港某養(yǎng)殖場。
　　試驗(yàn)時間：2011年3月25日-2011年4月24日。
　　1.3 高免肽最小抑菌濃度的測定
　　采用微量稀釋法進(jìn)行測定。把處于對數(shù)生長期OD600≈0.5（細(xì)菌計數(shù)約10^6）的指示菌用LB 培養(yǎng)液稀釋到OD600≈0.05，分別接種到96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每孔90 μL。將高免肽用pH 值6.0 的0.1 mol/LPBS 倍比稀釋。各取10 μL 分別加入培養(yǎng)孔中，混勻，每組重復(fù)3 個孔。設(shè)加LB 培養(yǎng)液為陰性對照，接種細(xì)菌的為陽性對照。置37 ℃培養(yǎng)箱孵育12 h后取出，用自動酶標(biāo)儀測量培養(yǎng)液的OD600值，將完全抑制菌體生長的最低蛋白濃度確定為最小抑菌菌濃度（MIC）。
　　1.4 實(shí)驗(yàn)動物的選擇與養(yǎng)殖
　　大黃魚、真鯛采用海水網(wǎng)箱養(yǎng)殖，全冰鮮飼料喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)組按每噸飼料添加高免肽1kg，飼養(yǎng)30 d，每天抽樣檢查。對照組飼喂不添加任何添加物的冰鮮飼料。
　　白鰱、草魚、花鰱魚采用池塘養(yǎng)殖方式，水深0.8～1.0 m，每667 m2 投入魚苗10 萬尾，基礎(chǔ)餌料為黃豆?jié){，實(shí)驗(yàn)組按每噸飼料添加高免肽1kg，飼養(yǎng)25 d，每天抽樣檢查。對照組飼喂不添加任何藥物。
　　青蝦苗由長江直接捕撈的抱仔青蝦所繁育的蝦苗（長江蝦苗），每池平均放養(yǎng)規(guī)格7 000 尾/kg，每口池放養(yǎng)數(shù)量約6 萬尾，重量為8.6 kg。每日2 次喂料，基礎(chǔ)飼料為：豆粉、魚粉、皮糠、次粉、貝殼粉、礦物質(zhì)、螺旋藻混合物。實(shí)驗(yàn)組添加抗菌肽，按每噸飼料添加抗菌肽1kg。對照組飼喂不添加任何添加物的基礎(chǔ)飼料。
　　1.5 飼養(yǎng)管理
　　堅持每天2 次巡池，檢查實(shí)驗(yàn)魚蝦攝食情況，及時調(diào)整日投餌量，嚴(yán)格檢查排水過濾設(shè)施是否破損，及時撈出殘餌雜物、多余水草，捕捉蛙、蛇等敵害生物。保證微流水的暢通、有充足的氧氣。定期使用生石灰進(jìn)行全池潑灑消毒，生石灰用量為每口池
　　每次7.5 kg。
　　1.6 生產(chǎn)性能指標(biāo)測定
　　每天采集數(shù)據(jù)至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，統(tǒng)計成活率、畝平均產(chǎn)量、平均個體重，計算餌料報酬等，并對發(fā)病率進(jìn)行λ？卡方顯著性分析。ndm
　　2 結(jié)果
　　2.1 高免肽的最小抑菌濃度
　　通過微量稀釋法測得高免肽對大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌的MIC 分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。
　　2.2 大黃魚和真鯛養(yǎng)殖結(jié)果
　　飼養(yǎng)30 d，高免肽實(shí)驗(yàn)組魚苗色澤鮮艷，大小均一。大黃魚實(shí)驗(yàn)組的發(fā)病率為15.1%，對照組為26.3%，下降了11.2%。真鯛實(shí)驗(yàn)組的發(fā)病率為17.6%，對照組為20.4%，下降了2.8%。可見高免肽顯著或極顯著降低大黃魚和真鯛的發(fā)病率（P<0.05）或（P<0.01）。實(shí)驗(yàn)組大黃魚的日增重比對照組高0.14 g/d，真鯛的日增重比對照組高0.17 g/d，表現(xiàn)出較好的生產(chǎn)性能（表1）。
　　表1 高免肽對大黃魚、真鯛生產(chǎn)性能的影響

組別		日平均增重（g/d）	發(fā)病率 （%）	死亡率 （%）	餌料系數(shù)	投入產(chǎn)出比
大黃魚	實(shí)驗(yàn)組	1.42	15.1*	7.6	8.64	1:1.227
	對照組	1.28	26.3	13.2	9.33	1:1.163
真鯛	實(shí)驗(yàn)組	1.62	17.6*	3.4	6.52	1:1.281
	對照組	1.45	20.4	5.1	8.41	1:1.205

　　2.3 白鰱、草魚和花鰱魚養(yǎng)殖結(jié)果見表2.
　　表2 高免肽對白鰱、草魚和花鰱魚生產(chǎn)性能的影響

組別		數(shù)量 （萬尾）	成活率 （%）	平均產(chǎn)量 （kg/畝）	平均體重 （g/尾）
白鰱魚	實(shí)驗(yàn)組	14	48.77*	0.45	1.010
	對照組	14	40.00	0.38	0.801
草魚	實(shí)驗(yàn)組	10	22.75*	20.54	1.021
	對照組	10	16.80	17.12	0.999
花鰱魚	實(shí)驗(yàn)組	10	68.01*	36.65	0.554
	對照組	10	53.50	29.74	0.5445

　　表2可以看出應(yīng)用高免肽后，白鰱的成活率由40%提高至48.77%，草魚的成活率由16.8%提高至22.75%，花鰱魚的成活率由53.5%提高至68.01%。各實(shí)驗(yàn)組和對照組比較分別提高了21.93%、35.42%和24.12%。λ？卡方分析表明，高免肽極顯著提高白鰱、草魚和花鰱魚的成活率（P<0.01）。草魚和花鰱的餌料系數(shù)分別降低18.7%和22.9%，每畝平均產(chǎn)量也明顯提高18.42%、19.98%、23.23%。
　　2.4 青蝦養(yǎng)殖結(jié)果見表3.
　　表2 高免肽對青蝦生產(chǎn)性能的影響

組別	體長（cm)	平均產(chǎn)量（kg/畝）
試驗(yàn)組	2.3	101
對照組	1.4	58.5

　


    　由表3可知，至實(shí)驗(yàn)期結(jié)束，實(shí)驗(yàn)組青蝦平均增長了2.3cm，對照組為1.4 cm。實(shí)驗(yàn)組的平均增長是對照組的1.64 倍，比對照組提高了64.29%。實(shí)驗(yàn)組平均產(chǎn)量101 kg/667 m2，對照組平均產(chǎn)量58.5 kg/畝，實(shí)驗(yàn)組平均產(chǎn)量是對照組的1.73 倍，比對照組提高72.65%。
　　3 討論
　　高免肽是機(jī)體非特異性免疫不可缺少的重要組成部分，可以使細(xì)菌的細(xì)胞膜去極化或者形成“孔洞”，造成細(xì)胞內(nèi)容物外流或者肽分子進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部與DNA、RNA 等形成靶向作用，進(jìn)而殺死細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，體外高免肽對環(huán)境中常見的細(xì)菌大腸桿菌K99、金黃色葡萄球菌CowanⅠ和枯草芽孢桿菌敏感，最小抑菌菌濃度分別為0.78、3.12 和6.25 μg/mL。添加進(jìn)飼料中高免肽仍具有顯著的抗菌活性，可以顯著提高魚苗的抗病能力。將高免肽用于魚苗培育階段，平均成活率可以提高10%以上。同時也發(fā)現(xiàn)，高免肽也能明顯提高魚、蝦的生長速度及飼料利用效率，日增重平均增加，餌料報酬亦增加。
　　高免肽除具有抗菌、殺菌作用，對病毒、真菌、寄生蟲等其他病原微生物具有較強(qiáng)的抑制作用，還能與宿主體內(nèi)某些陽離子蛋白、溶菌酶或抗生素協(xié)同作用，增強(qiáng)其抗菌效應(yīng)。另外，高免肽生物學(xué)活性穩(wěn)定，在高離子強(qiáng)度和酸、堿環(huán)境中或100 ℃加熱10 min 時仍具有殺菌抑菌作用。實(shí)驗(yàn)用高免肽可耐高溫（150 ℃以上），能耐受飼料制粒時的高溫。同時，高免肽是一種無毒、無害、綠色環(huán)保的產(chǎn)品，還具有不易出現(xiàn)耐藥性突變、分子量小、熱穩(wěn)定性好、水溶性好、作用迅速等特點(diǎn)。