胃蛋白酶消化率檢測

于炳欣

一、原理

脫過脂的試樣，用溫?zé)岬奈傅鞍酌溉芤?，在恒溫、持續(xù)不斷地攪拌下消化16h，過濾分離不溶性殘渣，洗滌、干燥，測定殘渣的粗蛋白含量。同時，測定空白和脫脂未酶解試樣的粗蛋白含量。

二、試劑

本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑，除特殊說明外，均為分析純

實驗室用水應(yīng)符合GB/T 6682中三級水的規(guī)格

2.1 0.2%胃蛋白酶溶液:將6.1 mL濃鹽酸稀釋至1 000 mL水中(溶液pHl-2)，加熱至42-45℃ ,加入2g活性為1:10000生化級胃蛋白酶〔若活性不是1：10000，可使用活性1:3000生化級胃蛋白酶 (不可使用非生化級胃蛋白酶)，應(yīng)注意胃蛋白酶溶液中胃蛋白酶濃度應(yīng)為每毫升20IU〕，并緩慢攪拌直至溶解 勿在加熱板上加熱胃蛋白酶溶液或配制時過熱。臨用前配制。

2.2 乙醚

2.3 丙酮

2.4 定氮試劑:按GB/T 6432中試劑及配制方法規(guī)定。5 儀器、設(shè)備

三、儀器設(shè)備

3.1 恒溫式平轉(zhuǎn)搖床:溫控范圍20-50℃，水浴式或空氣浴式均可，轉(zhuǎn)速可調(diào)(15-300 r/min).

3.2 實驗室用樣品粉碎機(jī)

3.3 索氏抽提器、脫脂設(shè)備:按GB/T 6433中儀器、設(shè)備規(guī)定。

3.4 定氮儀器、設(shè)備:按GB/T 6432中儀器、設(shè)備規(guī)定。

四、測定步驟

4.1 脫脂

稱取1-2g試樣用乙醚脫脂(含脂肪小于1%可不脫脂，含脂肪1%---10%建議脫脂，含脂肪大于10%則必須脫脂)。脫脂方法可參照GB/T 6433中粗脂肪抽提方法進(jìn)行。脫脂后的樣品需烘干。

4.2 胃蛋白酶消化

稱取脫脂烘干后的樣品若干克(精確至0.0002g)于250 ml帶蓋磨口瓶中，加150ml新配制的并已預(yù)熱至42-45℃的胃蛋白酶溶液，要確保樣品完全被胃蛋自酶溶液浸濕，蓋緊瓶蓋，將瓶夾于恒溫?fù)u床上，于45℃恒定攪動16h進(jìn)行保溫消化。

4.3 消化殘渣的處理

從攪動器上取下磨口瓶，呈45。角放置，讓殘渣沉淀15min以上，隨后在鋪有快速濾紙的布氏漏斗上抽濾，先用少量水將瓶蓋上的殘渣洗至濾紙上，再將磨口瓶保持沉淀時的角度移至布氏漏斗上，慢慢傾出內(nèi)容物，使之通過濾紙后形成連續(xù)的細(xì)流，避免任何不必要的攪動。液體通過濾紙的速度應(yīng)與傾入的速度相同。當(dāng)上層液體通過濾紙后，于瓶中加人15 mL丙酮，用拇指蓋住瓶口劇烈振搖，放開。再用拇指堵住瓶口，在濾紙上方將瓶倒置振搖，放開拇指讓丙酮和殘渣流到濾紙上。再用一份15ml的丙酮進(jìn)行洗滌，照上法振搖和倒出。檢查瓶子，并用丙酮再次洗滌。當(dāng)全部液體通過濾器后，用洗瓶以少量丙酮洗滌漏斗壁上殘渣兩次，并抽干。從布氏漏斗上小心取下載有殘渣的濾紙，無損地移人凱氏燒瓶中，并將凱氏燒瓶置于105 ℃烘箱內(nèi)烘干。

4.4 粗蛋白的測定

將上述烘干的殘渣按GB/T 6432中方法測定粗蛋白含量(W2)。同時，稱取脫脂烘干后的樣品若干克(精確至0.0002g)，直接按GB/T 6432方法測定脫脂未酶解的樣品中粗蛋自的含量(W1)。

五、結(jié)果計算

X(%)=(W1- W2)*100/ W1

式中:X-一試樣的胃蛋白酶消化率，%

W1--脫脂未酶解的原樣品中粗蛋白的平均含量，%

W2--脫脂酶解后殘渣中粗蛋白的平均含量，%

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